XLD plate 만들기

안녕하세요-

오늘 포스팅할 내용은 XLD agar plate 만드는 방법입니다!!!

정확한 명칭은 xylose-lysine-desoxycholate agar인데요~

저희가 사용하는 제품은 Difco 꺼를 사용하고 있습니다~ (자료를 찾다보니 komed라는 회사의 국내 제품도 있어요^^)

이 XLD agar plate는 선택/감별배지입니다~

이 배지에 박테리아를 키우게 되면 몇몇 종들은 특이적인 색을 띄운다고 합니다!!

(전 Salmonella만 테스트해봤어요ㅋㅋ)

 

우선 원리!!!

솔직히, 제가 생화학은 잘 모르는,,, 거의 백지라,,, 잘 이해는 못했지만,,,

komed라는 회사에서 설명해준 것에 의하면 xylose, lactose, sucrose 이 3가지의 당을 분해하면 phenol red 지시약은 pH변화에 따라 집락의 색이 변화게 된다고 합니다~

특히 Salmonella의 경우에는 Sodium thiosulfate와 ammonium citrate에 의해 H2S (황화수소)를 생성하면서 colony의 중심부가 흑색으로 변하게 됩니다~

그래서 저같은 경우에는 mouse의 장에서 Salmonella를 선택적으로 분리해야해서 이 XLD plate를 사용하게 되었습니다!!!

 

그런데!!!

보통 agar plate를 만들기 위해서는 autoclave를 돌리게 되는데요~

이 배지는 autoclave를 돌리면 안됩니다!!! overheat을 가하면 안된다고 배지 제조 방법에 나와 있으니, 조심하셔야 해요!!!

 

그래서 만드는 방법은 아래와 같습니다!!!

준비물 : 2L 유리플라스크, 1L 증류수, 호일 (또는 플라스크 마개), 마그네틱바, 핫플레이트, plate dish가 필요합니다!!

 

1. 먼저 2L 플라스크에 1L 증류수와 마그네틱바를 넣은 후 autoclave를 돌립니다.

(멸균수를 이용하셔도 되지만, 끓이는데 시간이 오래 걸릴 거예요~)

 

2. autoclave가 끝나고 나서 증류수의 온도가 약간 식으면 (개인적으로 60도 이상을 선호해요^^ 그래야 빨리 녹이니깐요ㅋㅋ)

  각각 사용하는 배지에 써있는 것처럼 필요한 양만큼 계산해서 넣어주세요~

  제가 쓰는 것은 1L 당 55g을 넣게 되어 있습니다~

3. stir를 돌리면서 가열해주세요~

4. 투명한 붉은 색이 되면 plate dish에 붓고 굳힌 다음에 사용하시면 되요!!!

 

*저는 한번 핫플레이트가 고장나 있어서 어쩔 수 없이 autoclave를 이용했습니다~

하지만 overheat되면 안되니깐 100도가 되자마자 autoclave를 정지시킨 후에 사용했습니다.

(사용했을 때 Salmonella를 선별해 내는데에 전혀 문제가 없었어요ㅋㅋㅋ)

 

만약에 XLD plate가 검은 색을 띈다면 overheating이 되었을 수 있어요!!

 

그리고 아래 그림은 XLD plate에서 선별할 수 있는 박테리아의 결과입니다~

(위에 사진과 아래 사진은 모두 BD에서 찾은 사진이예요!!!)

 

그리고 아래에는 혹시 조성이 필요하신 분 있을까봐 BD제품의 조성을 올려요!!!ㅋㅋ

하지만 회사마다 조성은 다를 수 있어요ㅋㅋ